Noor Andryan Ilsan, Ph.D Pengarang Maulin Inggraini S. Si, M. Si Ketua Penguji Arvindha Pramudya Pengarang

ABSTRAK Nyamuk Aedes aegypti adalah vektor utama virus dengue penyebab Demam Berdarah Dengue (DBD). Upaya pengendalian dilakukan menggunakan larvasida temephos. Penggunaan temephos secara terus-menerus dapat memicu terjadinya resistensi larva nyamuk. Tujuan penelitian ini untuk menentukan metode ekstraksi dan kondisi PCR konvensional yang optimal untuk amplifikasi gen ace-1 pada larva Aedes aegypti yang berkaitan dengan analisis mutasi gen ace-1 penyebab resistensi larva terhadap temephos. Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorium dengan pendekatan deskriptif-komparatif kuantitatif. Sampel larva dikumpulkan dari larvitrap dengan metode purposive sampling. Uji kerentanan dilakukan untuk menilai status resistensi larva pada konsentrasi diagnostik temephos 0,02 mg/L. Selanjutnya dilakukan ekstraksi DNA, amplifikasi gen ace-1 menggunakan PCR konvensional, visualisasi hasil elektroforesis, serta analisis sekuensing Sanger. Hasil penelitian menunjukkan bahwa larva Aedes aegypti dari wilayah sekitar Kecamatan Jatiasih mengalami mortalitas 100% pada paparan temephos 0,02 mg/L sehingga masih tergolong sensitif terhadap temephos. Metode ekstraksi DNA dengan penambahan etanol dan isopropanol menghasilkan kualitas DNA yang lebih baik dibandingkan metode tanpa penambahan kedua reagen tersebut. Perlakuan vortex selama 3 menit saat ekstraksi menghasilkan konsentrasi DNA lebih tinggi dibandingkan 1 menit. Kondisi PCR terbaik diperoleh pada suhu annealing 58°C dengan produk amplifikasi berukuran 528 bp yang mendekati ukuran target gen ace-1. Hasil sekuensing menunjukkan kualitas sekuens primer reverse lebih baik dibandingkan primer forward, dan analisis BLAST mengonfirmasi kesesuaian sekuens dengan gen ace-1 pada basis data GenBank. Penelitian ini menunjukkan bahwa metode ekstraksi dengan perlakuan vortex 3 menit serta suhu annealing 58°C merupakan kondisi optimal untuk amplifikasi gen ace-1 pada larva Aedes aegypti. Kata Kunci : Aedes aegypti, Gen ace-1, PCR, Optimasi, Elektroforesis