Detail Cantuman

ABSTRAK
Nyamuk Aedes aegypti adalah vektor utama virus dengue penyebab Demam Berdarah Dengue (DBD). Upaya pengendalian dilakukan menggunakan larvasida temephos. Penggunaan temephos secara terus-menerus dapat memicu terjadinya resistensi larva nyamuk. Tujuan penelitian ini untuk menentukan metode ekstraksi dan kondisi PCR konvensional yang optimal untuk amplifikasi gen ace-1 pada larva Aedes aegypti yang berkaitan dengan analisis mutasi gen ace-1 penyebab resistensi larva terhadap temephos. Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorium dengan pendekatan
deskriptif-komparatif kuantitatif. Sampel larva dikumpulkan dari larvitrap dengan metode purposive sampling. Uji kerentanan dilakukan untuk menilai status resistensi larva pada konsentrasi diagnostik temephos 0,02 mg/L. Selanjutnya dilakukan ekstraksi DNA, amplifikasi gen ace-1 menggunakan PCR konvensional, visualisasi hasil elektroforesis, serta analisis sekuensing Sanger. Hasil penelitian menunjukkan bahwa larva Aedes aegypti dari wilayah sekitar Kecamatan Jatiasih mengalami mortalitas 100% pada paparan temephos 0,02 mg/L sehingga masih tergolong sensitif terhadap temephos. Metode ekstraksi DNA dengan penambahan etanol dan isopropanol menghasilkan
kualitas DNA yang lebih baik dibandingkan metode tanpa penambahan kedua reagen tersebut. Perlakuan vortex selama 3 menit saat ekstraksi menghasilkan konsentrasi DNA lebih tinggi dibandingkan 1 menit. Kondisi PCR terbaik diperoleh pada suhu annealing 58°C dengan produk amplifikasi berukuran 528 bp yang mendekati ukuran target gen ace-1. Hasil sekuensing menunjukkan kualitas sekuens primer reverse lebih baik dibandingkan primer forward, dan analisis BLAST mengonfirmasi kesesuaian sekuens dengan gen ace-1 pada basis data GenBank. Penelitian ini menunjukkan bahwa metode ekstraksi dengan perlakuan vortex 3 menit serta suhu annealing 58°C merupakan kondisi optimal untuk amplifikasi gen ace-1 pada larva Aedes aegypti.

Kata Kunci : Aedes aegypti, Gen ace-1, PCR, Optimasi, Elektroforesis